Среда для культивирования клеток является питательной основой для искусственной имитации среды роста клеток животных in vivo и поддержания выживания и пролиферации клеток in vitro. питательное вещество. Итак, каковы общие проблемы, возникающие при использовании среды для культивирования клеток? Сделаем анализ.
1. Выбор буферной системы и изменение рН среды для культивирования клеток.
Поскольку оптимальный рН для большинства клеток составляет от 7,0 до 7,4, отклонения от этого диапазона могут оказывать вредное воздействие на рост клеток. Однако потребности различных клеток в pH не совсем одинаковы. Первичные культивируемые клетки обычно имеют плохую устойчивость к колебаниям pH, в то время как бесконечные клеточные линии обладают высокой устойчивостью. Поэтому в первичной культуре большее значение имеет буферная система в питательной среде. В обычной среде для культивирования клеток используется сбалансированная солевая система, но в разных культуральных средах или в одной и той же серии культуральных сред используются разные сбалансированные солевые системы. Например, все серии 199 и серии MEM имеют системную культуральную среду Хэнкса и системную культуру Эрла. база. Некоторые среды не являются вышеупомянутой обычной сбалансированной солевой системой, например среда RPMI1640, среда F12. Сбалансированная солевая система среды MEM с низким содержанием сыворотки также не является обычной сбалансированной солевой системой, и буферная способность сбалансированной солевой системы сильнее, чем у обычной сбалансированной солевой системы.
культура клеток
Есть много причин падения pH во время культивирования клеток. Когда клетки растут очень быстро, значение рН обычно быстро падает, что можно решить своевременным пассированием, увеличением коэффициента пассажей или уменьшением объема сыворотки. Кроме того, чрезмерное затягивание крышки флакона с культурой, недостаточная буферная способность буферной системы NaHCO3, неправильная концентрация соли в культуральной среде, бактериальное, дрожжевое или грибковое загрязнение также могут часто вызывать быстрое падение pH. На данный момент решить ее можно следующими способами:
1) Увеличьте концентрацию NaHCO3 в культуральной среде или уменьшите концентрацию CO2 в инкубаторе. Когда содержание NaHCO3 составляет от 2,0 г/л до 3,7 г/л, соответствующая концентрация CO2 составляет 5~10 процентов;
2) переключиться на CO2-независимую культуральную среду;
3) Правильно ослабьте крышку бутылки. Добавьте буфер HEPES в культуральную среду, чтобы получить конечную концентрацию 10-25 мМ;
4) Используйте культуральный раствор на основе соли Эрла в культуральной среде с СО2 и используйте культуральный раствор, приготовленный на основе соли Хэнкса, в культуральной среде с атмосферным воздухом;
5) Откажитесь от посева или стерилизуйте антибиотиками, если причиной является загрязнение.
2. Несколько важных добавок обычно используются в средах для культивирования клеток и проблемы, на которые следует обратить внимание в процессе использования.
Феноловый красный используется в качестве индикатора pH в средах для культивирования клеток. В целом о значении рН среды можно судить по индикаторному действию фенолового красного, но содержание фенолового красного в малосывороточной или бессывороточной культуральной среде отличается от такового в обычной культуральной среде и не может наблюдаться. невооруженным глазом или Значение pH определяется опытным путем, и для измерения рекомендуется использовать pH-метр. Феноловый красный обычно не оказывает существенного влияния на качество биологических продуктов, продуцируемых в средах для культивирования клеток, содержащих сыворотку, и также может быть удален с помощью методов очистки, но феноловый красный может вызывать внутриклеточный дисбаланс натрия/калия в средах для культивирования клеток без сыворотки. , влияющие на рост клеток.
планшет для культивирования клеток
Бикарбонат натрия в основном используется в качестве буферной системы в среде для культивирования клеток, а также регулирует осмотическое давление. Обычно рекомендуемое количество бикарбоната натрия в инструкции по применению продукта является стандартным и безопасным количеством, которое получено на основе практического опыта на научной основе. Однако из-за разных клеточных линий (штаммов) одна и та же клетка может адаптироваться к разным средам (различная переносимость клеток и т. д.), и существуют региональные различия в качестве воды и т. д., которые также могут незначительно изменяться в реальном производстве. процесс, но использование тех, кому необходимо сделать соответствующие тесты (физико-химические и клеточные тесты и т. д.).
HEPES представляет собой неионогенный буфер с хорошей буферной емкостью в диапазоне pH от 7,2 до 7,4 и может быть токсичным для некоторых клеток при высоких концентрациях. Буфер HEPES можно использовать с низким уровнем карбоната натрия (0,34 г/л), чтобы компенсировать повышение осмотического давления, вызванное добавлением дополнительного количества HEPES. Его безопасный диапазон концентраций составляет 10 ~ 25 ммоль/л.
Пируват натрия можно использовать в качестве альтернативного источника углерода в клеточной культуре, и хотя клетки предпочитают глюкозу в качестве источника углерода, клетки также могут метаболизировать пируват натрия в отсутствие глюкозы.
Глютамин очень нестабилен в растворе. Он может быть разложен до 50 процентов при 4 градусах в течение 1 недели. Лучше всего готовить его отдельно для использования, хранить в холодильнике при температуре -20 градусов и добавлять в среду для культивирования клеток перед использованием.
