Применение бутылки сыворотки
Флакон с сывороткой изготовлен из боросиликатного стекла с низкой экстракцией, а бесцветная прозрачная бутылка соответствует требованиям USP Type I и ASTM E 438 Type I Standard Class A. Ее можно автоклавировать при 121° в течение 20 минут, и ее можно разделить на 125 мл. , 250 мл, 500 мл, 1 л, 2 л в зависимости от объема.
Бутылка для сыворотки представляет собой контейнер для хранения сыворотки, который обычно изготавливается из ПЭТ-материала методом инъекционного выдувания. Среда является питательным веществом, необходимым для роста клеток. В зависимости от источника он делится на синтетическую среду и естественную среду, каждая из которых может храниться во флаконах с сывороткой.
Бутылка с сывороткой
Натуральная среда:
Наиболее часто используемой природной средой является сыворотка, в основном телячья сыворотка. Сыворотка содержит различные факторы роста клеток, факторы, способствующие адгезии, и их полиактивные вещества. В сочетании с синтетической средой клетки могут плавно размножаться и расти. Сыворотку необходимо хранить в специальных флаконах для сыворотки при температуре от -5 до -20 градусов.
Синтетическая среда:
Синтетическая среда составляется строго в соответствии с типом и количеством веществ, необходимых клеткам. Существует множество типов и известных компонентов, что облегчает контроль условий эксперимента. Содержит углеводы, аминокислоты, липиды, неорганические соли, витамины, микроэлементы и факторы роста клеток. Однако, по сравнению с природной средой, некоторые природные неизвестные компоненты не могут быть заменены известными химическими компонентами. Следовательно, основная синтетическая среда, используемая в клеточной культуре, должна также содержать определенное количество компонентов натуральной среды, чтобы превзойти синтетическую культуру. Недостаточно основы, наиболее распространенной практикой является добавление телячьей сыворотки.
Флакон с сывороткой имеет квадратную форму, удобен для захвата, устойчив к большинству кислот и щелочей, температура охрупчивания составляет -70 градусов, и он по-прежнему обладает определенной ударной вязкостью при -30 градусах. Это хороший упаковочный контейнер, будь то натуральная среда или синтетическая культура. можно хранить во флаконах с сывороткой.
Для выделения, культивирования и идентификации эндотелиальных клеток-предшественников пуповинной крови человека и создания бесклеточных сосудистых каркасов с помощью усовершенствованного метода замораживания-оттаивания.
Изучить осуществимость и ценность клинического применения эндотелиальных клеток-предшественников, выделенных и культивированных из пуповинной крови человека.
Методы: Собирали пуповинную кровь плодов, перенесших доношенное кесарево сечение в отделении акушерства и гинекологии Первой дочерней больницы Медицинского колледжа Бэнбу, помещали во флакон с сывороткой, содержащий 50Ед/мл гепарина. в асептических условиях, хранили в холодильнике при 4 градусах и транспортировали в клетки. В комнате для культивирования мононуклеарные клетки пуповинной крови получали центрифугированием в градиенте плотности. Полученные мононуклеарные клетки делили на две части и добавляли среду M199 с фетальной телячьей сывороткой (FCS-M199) и среду с аутологичной сывороткой M199 (AS-M199). Их высевали в чашки для культивирования с человеческим фибронектином (HFN) и без него (обозначены как: F(0), F(1), A(0), A(1)) соответственно. Проводили индукцию, дифференцировку и размножение in vitro.
Наблюдались морфологические изменения прикрепленных клеток в течение всего процесса индукции и дифференцировки, и они были идентифицированы с разных точек зрения в сочетании с соответствующими методами, такими как иммуногистохимия, иммунофлуоресценция и проточная цитометрия.
Результаты: Через 12 дней культивирования мононуклеарные клетки пуповинной крови начали прилипать. Через 3 дня начала проявляться веретенообразная форма, а затем количество прикрепившихся клеток постепенно увеличивалось и постепенно приобретало веретенообразную форму. При культивировании до одной недели формировалась типичная колония с веретенообразными клетками вокруг и круглыми клетками в центре. Когда клетки культивировали в течение 14 дней, взаимосвязанные кластеры клеток постепенно соединялись и образовывали структуру, подобную сети. В то же время, с непрерывным увеличением времени культивирования, длинные веретенообразные клетки также начали постепенно укорачиваться и демонстрировали типичное изменение, похожее на брусчатку.
Адгезивные клетки культивировали в течение одной недели, и было обнаружено, что количество клеток в среде с человеческим фибронектином было значительно выше, чем без человеческого фибронектина, и не было значительного изменения количества клеток в двух разных средах. #Расходные материалы для инструментов#
