Для распространенных на рынке чашек Петри со стеклянным дном обычно делают отверстие на дне пластиковой чашки Петри, а затем на дно чашки приклеивают покровное стекло или предметное стекло толщиной 170-220 мкм. чашку Петри бестеневым клеем или силикагелем. Не все дно чашки Петри сделано из стекла. Область, пригодная для наблюдения, находится только в области перфорации. Однако из-за гидрофобности стекла при культивировании клеток клетки не могут хорошо прилипать к стеклу, и состояние роста не является хорошим, и даже во время конфокального сканирования возникает явление расслоения клеток.
Для того, чтобы клетки хорошо прилипли, необходимо подтвердить, что определенные белковые реагенты были покрыты, прежде чем использовать чашки со стеклянным дном для культивирования клеток.
одеяло своими руками
Разные клеточные культуры требуют разных реагентов для покрытия. В то же время, поскольку белок, используемый для покрытия, является биологическим продуктом, чистота продукта и дозировка белка покрытия разных компаний различны. Этот технический пост предназначен только для справки. Конкретная дозировка реагентов для покрытия должна быть указана в инструкциях используемых марок. . И лучше всего провести эксперимент с градиентом с реагентами, которые вы используете, чтобы найти наиболее подходящую концентрацию покрытия.
Вот пример поли-L-лизина (PLL, sigma, P4832, 100 мкг/мл):
Покрытие PLL подходит для подавляющего большинства клеток, особенно для культуры нейронов центральной системы. Необходимо, чтобы содержание белка (мкг/см2) на единицу площади достигало желаемого количества во время использования. Рекомендуемое количество покрытия для PLL в этом примере составляет 2 мкг/см2. Необходимо рассчитать необходимое количество белка в соответствии с площадью покрытия и объемом покрытия.
Например: чашка Петри со стеклянным дном 35 мм, площадь роста клеток составляет 3,5 см2, площадь покрытия составляет 4,1 см2, а объем раствора для покрытия составляет 400 мкл, тогда рекомендуемая дозировка составляет 2 мкг/см2. Затем необходимо 8,2 мкг PLL в одной лунке. Если добавляют только 400 мкл раствора PLL, концентрация раствора PLL составляет 20,5 мкг/мл (около 20 мкг/мл). Поэтому исходный раствор необходимо разбавлять сверхчистой водой.
Конкретные шаги:
1. Разбавьте исходный раствор PLL сверхчистой водой в соотношении 1:5.
2. Добавьте 400 мкл разведения PLL в каждую чашку Петри со стеклянным дном диаметром 35 мм.
3. Инкубируйте в течение 1-2 часов при комнатной температуре и аспирируйте раствор PLL.
4. Тщательно промыть 3 раза 2 мл раствора PBS или бессывороточной среды и аспирировать промывной раствор.
5. Непосредственно добавьте клеточную суспензию для культивирования.
Оценка метода
Из-за различных свойств различных белков покрытия разные белки покрытия используются по-разному. Новое загрязнение часто возникает из-за необходимости покрывать посуду со стеклянным дном. Кроме того, загрязнение часто обнаруживается уже после того, как клетки были подняты, что не только оттягивает время, но и приводит к трате расходных материалов набора. В конце концов, белковые реагенты с покрытием и чашки со стеклянным дном гарантированного качества стоят дорого (чашки со стеклянным дном низкого качества могут протекать, потому что клей не липкий или используемый клей токсичен для клеток).
Конфокальные чашки Петри без покрытия
Для детей, желающих сэкономить время и силы, удобнее использовать конфокальные чашки для культивирования без покрытия.
Факторы, которые следует учитывать при выборе подходящей чашки для культивирования: подходит ли она для прилипания ваших собственных клеток, соответствуют ли оптические характеристики чашки для культивирования конфокальным требованиям.
Чашки Петри, отвечающие требованиям вышеуказанных факторов, не ограничиваются чашками со стеклянным дном с покрытием. На самом деле всем известно, что пластиковая посуда дешевле и к ней легче прилипают клетки, чем к стеклянной. Вот пример конфокальной чашки для культивирования из Шанхая Цзинган, чтобы рассказать о параметрах, которые должна иметь чашка для культивирования, подходящая для конфокальных экспериментов:
Видно, что физические параметры конфокальных культуральных чашек, отвечающих требованиям прямого использования, очень близки к стеклу, но в то же время они также обладают гидрофильными свойствами, что позволяет лучше прилипать большинству клеток; и пластичность лучше, чем стекло. Он позволяет большинству клеточных линий и первичных клеток непосредственно прикрепляться к стенке и не является хрупким, что является хорошим выбором.
Вы также можете найти наиболее подходящую конфокальную культуральную чашку для своего эксперимента в соответствии с вашими конкретными экспериментальными требованиями и параметрами, указанными в приведенной выше таблице.
Оценка метода
Выбор этого типа чашек Петри не требует дополнительного покрытия, что значительно снижает риск загрязнения. А поскольку с пластиковым дном работать легче, для его крепления ко дну чашки Петри не требуется клей. Исключите возможность утечки или цитотоксичности.
