Планшеты для клеточных культур широко используются и являются важными расходными материалами в экспериментах с клеточными культурами, поскольку они могут сэкономить время и реагенты для экспериментов с клетками, а также могут одновременно устанавливать несколько динамических переменных для облегчения наблюдения и обнаружения.
культуральная пластина
1. Крышки 96-луночных культуральных чашек или чашек Петри очень свободны, что удобно для вентиляции, но не проскользнут ли внутрь бактерии, плесень и другие загрязняющие вещества?
Ответ: (1) Покров очень рыхлый и относится к полуоткрытой культуре. Цель этого состоит в том, чтобы дышать (на самом деле, чтобы обеспечить полный обмен CO2 вне чашки для культивирования с чашкой для культивирования для поддержания значения pH среды).
(2) Есть преимущества и недостатки, что увеличивает возможность загрязнения. Кроме того, это вызывает испарение жидкости в чашке Петри, что примечательно точным дозированием препаратов. Таким образом, необходимы следующие две меры:
а) Воздух в инкубаторе должен быть чистым (обычное ультрафиолетовое освещение, обработка спиртом, инкубатор нужно как можно меньше включать и выключать)
б) Влажность в инкубаторе должна постоянно поддерживаться на уровне 100% (раковина, в которую в инкубатор помещается стерильная дистиллированная вода). Обратите внимание на асептическую работу!
2. Мои клетки высевают на культуральную чашку, и клетки всегда собираются в периферической части. Что я должен делать? Вижу, что посередине собраны клетки каких-то товарищей по оружию. Проблема в качестве пластины?
A: Как вы смешиваете свои клетки? Пипетка дует или культуральный планшет трясется? Если это последнее, и его трясут по кругу, то очень вероятно, что клетки будут отброшены к окружающей части за счет центробежной силы, возникающей в середине клеток. Меньше, больше четырех недель! Вы можете попробовать сами!
Хороший способ: прежде чем культивировать семенную пластину, поместите культуральную пластину в инкубатор на несколько часов для насыщения, а затем выньте ее. При посеве клеток усилие должно быть легким. Вы можете использовать капельницу сбоку от отверстия планшета для культивирования, медленно добавляя, чтобы позволить клеточной суспензии течь в лунки планшета, и культивируемые клетки растут практически равномерно. Не забывайте никогда не трясти осциллятор, иначе ваши клетки слипнутся, как вы сказали.
3. Мои клетки пассируются нормально, но когда один тип помещается в шестилуночный планшет (независимо от добавления лекарственного средства и контроля), всегда есть две или три лунки (случайные) клетки, которые плохо растут, маленькие и кажутся быть сломанным. Кто-нибудь сталкивался с этим? Какова причина?
A: Это может быть связано с температурой жидкости, которую вы добавляете. Если ваши клетки были только что извлечены, чтобы сменить среду и добавить среду, и среда также вскоре вынута из 4-градусного холодильника, клетки легко замерзнут до смерти. Рекомендуется сначала инкубировать среду в инкубаторе в течение 15 минут.
Кроме того, это также связано с состоянием роста ваших клеток. Клетки перед дозированием можно инкубировать с высокими концентрациями сыворотки. Убедитесь, что клетки находятся в хорошем состоянии.
Или его можно инкубировать на водяной бане 37-градуса, или проблема самой чашки для культивирования, вы можете попробовать другую чашку для культивирования. Другой возможностью является проблема состояния клеток, отрегулируйте концентрацию сыворотки при посеве в чашку.
4. Недавно я использовал шестилуночный культуральный планшет для инокуляции клеток. После культивирования в течение 24 часов я сменил среду. Перед сменой среды я заметил, что клетки прилипли к стенке, и состояние было очень хорошим. После смены среды я сразу же использовал микроскоп. Было замечено, что почти половина клеток в каждой лунке находилась в предсмертном состоянии. Клетки становятся очень маленькими и производят много мусора, в то время как другая половина клеток нормальная, существует водораздел между аномальными и нормальными клетками, верхний полукруг хороший, нижний полукруг плохой, как этот? В чем дело?
A: Вы можете увидеть, есть ли какая-либо из следующих причин
а. Культуральная чашка не расположена горизонтально;
б. Как насчет вашей питательной среды, если срок действия питательной среды истек, клетки не прилипнут. Попробуйте свежеприготовленную среду
в. Возможно проблема в плите. Нет проблем сменить планшет другой марки или использовать культуральный флакон.
д. Обращали ли вы внимание на влияние вентилятора при смене среды, особенно когда необходимо заменить много культуральных чашек, клетки легко сжимаются и разрываются из-за потери воды и ветра. Если это так, среду следует менять по одной, и не бойтесь тратить пипетку, обратите внимание на эффективность операции!
5. Прошло четыре дня с тех пор, как клетки были расщеплены и инокулированы в 24-луночный планшет, и средняя часть каждой лунки всегда была заполнена. Среду промывали PBS каждый день, и такая же ситуация происходила при смене среды на следующий день. Края длинные, а центр полон мертвых клеток?
Ответ: Если клетки плотные вокруг и разреженные в середине, причины примерно следующие:
Среды было добавлено слишком мало. В основном из-за проблемы натяжения жидкости.
Меньше ли воды на дне инкубатора;
Встряхивание после посева клеток было слишком сильным. Клетки распределяются вокруг за счет центробежной силы.
Ключом к равномерному распределению ячеек является то, что каждый тип ячеек имеет индивидуальные отличия, и операции с ячейками других людей могут вам не подойти. Таким образом, вы должны исследовать самостоятельно и найти набор правил, которые уникальны для ваших собственных клеток. У вас есть следующий опыт:
(1) Все клеточные суспензии для посева необходимо перемешать пипеткой перед посевом.
(2) Согласно записям, объем жидкости 24-луночного планшета составляет 1 мл, на самом деле объема 1 мл достаточно.
(3) При инокуляции добавляйте образец медленно и не забывайте слегка поворачивать кончик пипетки. Образец нельзя добавлять слишком быстро, чтобы избежать скопления клеток в одной точке добавления образца, и обратите внимание на добавление образцов в разные части, то есть при добавлении подвижного пистолета. Голову искусственно заставляют клетки иметь тенденцию к равномерному распределению. Это приводит к равномерному распределению ячеек.
