Формирование клеток включает в себя этапы инъекции, формирования и получения клеток. Клетки в колбе для культивирования клеток должны расти и развиваться до определенной степени. В этот момент необходимо полагаться на трипсин, чтобы переварить клетки на внешней стенке колбы, а затем ощутить его. В случае ферментов необходимо контролировать время переваривания.
Колба для культивирования клеток T75
Трипсин принадлежит к другому классу трипсинов, которые могут расщеплять белки на клеточных мембранах, слитых с колбами для клеточных культур. Растворяя белок на соответствующем участке, растворяется белок на стыке между белками, и клетка становится шарообразной за счет опорной силы клеточного каркаса собственной внутренней структуры, тем самым происходит разделение клеток. Уровень переваривания трипсина является ключевым фактором в формировании клеток: чрезмерное переваривание увеличивает количество клеточного детрита, увеличивается количество черного дебриса, клетки отпадают целиком, серьезно подвергая опасности жизнеспособность клеток, а некоторые клетки всплывают с выброшенным трипсином. если пищеварения недостаточно, клеткам трудно сдуться с внутренней стенки бутылки, а непрерывное выдувание и избиение также повредят клеточной активности.
колба для клеточной культуры
Бутылка с культуральным раствором белка сыворотки
В разных учреждениях или клетках действие ферментов поджелудочной железы неодинаково. Активность диспергированных клеток панкреатического фермента также связана с величиной его концентрации, температурой и продолжительностью воздействия. Когда рН составляет 8,0, а температура равна 37, уровень эффективности водного раствора панкреатического фермента относительно высок. При применении трипсина следует тщательно контролировать концентрацию, температуру и продолжительность, чтобы предотвратить повреждение клеток, вызванное чрезмерным перевариванием. Поскольку Ca2, Mg2 и белок сыворотки, белковые граммы снижают активность панкреатина, поэтому при приготовлении водного раствора панкреатина используйте BSS без Ca2, Mg2, например: раствор D-Хэнкса. При остановке пищеварения трипсин можно остановить с помощью среды для культивирования клеток сывороточного белка или замедлителя трипсина, чтобы остановить действие трипсина на клетки.
культуральная колба
Колба для культивирования клеток T25
Кроме того, если это недавно приобретенная клетка, вы можете использовать более низкую концентрацию трипсина, чтобы сначала изучить время пищеварения, и наблюдать, становятся ли клетки круглыми каждую минуту, и делать хорошие записи. В целом, при получении клеток в колбе для культивирования клеток необходимо контролировать время трипсинизации, чтобы эффективно поддерживать жизнеспособность клеток.
