Как мы все знаем, типы клеток, культивируемых в лаборатории, можно условно разделить на два типа: адгезивные клетки и суспензионные клетки, и в обоих состояниях существует лишь несколько типов клеток.
Суспензионные клетки относятся к типу клеток, которые могут расти во взвешенном состоянии в среде, не полагаясь на опоры, такие как лимфоциты и большинство клеток, происходящих из системы крови. (например, клетки лейкемии мыши WEHI-3, клетки лейкемии человека K-562, HL-60). В промышленности все больше и больше прикрепленных клеток одомашниваются и культивируются в полной суспензии. В настоящее время клетки SP2/0, NS0, CHO, BHK и HEK293 в основном используются в промышленности, и они в основном используются для производства рекомбинантных белков; пассажные клетки, обычно используемые в ветеринарных биологических продуктах, в основном включают клетки BHK21, культивированные в полной суспензии, клетки MDCK; и клетки Vero, клетки PK, клетки ST, клетки Marc145 и т. д. с помощью суспензионной культуры микроносителя, каждая клетка имеет разные характеристики.
Подвесные камеры
Ячейки подвески "thp-1" 200x
В общем, с суспензионными клетками легче обращаться, чем с прикрепленными клетками, потому что для пассажа суспензионных клеток не требуется трипсинизация. Но это не означает, что суспензионные клетки выращивать легче, чем прикрепленные. Для новичков это сложнее. Всегда возникают различные проблемы: например, почему всегда появляются мертвые клетки и дифференцировка клеток; условлено, что прохождение легкое, но результатом будет дифференциация; проблемы появляются снова после криоконсервации и восстановления!
Далее давайте обсудим некоторые ключевые моменты культивирования суспензионных клеток~
Пункт 1: Хватит терпения, очень нужно
Многие суспензионные клетки имеют относительно низкую жизнеспособность, когда они только что извлечены из криоконсервации. В это время нам нужно набраться терпения, чтобы дождаться завершения самовосстановления клеток и перехода в фазу логарифмического роста. Например, THP-1 (моноцитарный лейкоз человека) часто требуется 7-10 дней периода восстановления от оттаивания до нормальной пролиферации; Jurkat, Clone E6-1 (клетки Т-лимфоцитарного лейкоза человека) также нуждаются в 5-7 дней после выздоровления. Вернитесь в состояние перед заморозкой. Новички могут отказаться от тренировок в этот период, так что запаситесь терпением! Выращивание таких клеток также является процессом развития терпения!
Пункт 2: Оцените плотность прививки
Вообще говоря, плотность клеток суспензии не должна быть ниже 500 000/мл. Многие суспензионные клетки зависят от плотности, и непролиферация, вызванная низкой плотностью, также является одной из распространенных проблем для новичков. Конечно, очень мало клеток, состояние которых ухудшается при высокой плотности, таких как W6/32 (гибридомные В-клетки мыши). Поэтому очень важно искать соответствующую информацию, чтобы понять характеристики клеток, прежде чем культивировать неизвестные клетки. Только познав себя и врага, можно победить во всех битвах!
Частота замены среды не должна ограничиваться «четко». Клетки - живые существа. Во время непрерывного цикла культивирования определенные питательные вещества, такие как дополнительная среда и глюкоза, могут добавляться несколько раз в зависимости от состояния роста клеток для поддержания хорошего состояния роста клеток. . В процессе культивирования суспензии, с пролиферацией клеток, потреблением питательных веществ в исходной среде и увеличением количества метаболитов, жизнеспособность клеток будет снижаться, и своевременное добавление питательных веществ сделает клетки относительно хорошей жизненной средой. Я не буду здесь вдаваться в подробности и избегаю частого центрифугирования и замены жидкости.
Поговорим о методе замены жидкости:
①Центробежный метод полного обмена жидкости
То есть удалите всю старую среду центрифугированием (800-1000 об/мин, 5 мин) и замените ее свежей средой. Этот метод подходит для замены среды в хорошо поднятых суспензионных клетках с «твердой кожей» (таких как K562) или в текущей ситуации, когда клетки находятся в хорошем состоянии и имеют высокую плотность, что приводит к большому потреблению среды. Преимущество этого метода заключается в том, что среда тщательно меняется и часть клеточного детрита может быть удалена, но это также вызывает определенную степень механического повреждения клеток.
②Центробежный метод полуобмена
То есть путем центрифугирования (800-1000об/мин, 5 мин) 50-процентной клеточной суспензии заменяют 50-процентный объем свежей среды. Этот метод подходит для сравнения «лицемерных» трудно культивируемых клеток (таких как thp-1) или в ситуации, когда плотность низкая, но в состоянии настройки необходимо удалить больше дебриса.
③Метод обмена седиментационной жидкости
То есть вместо использования центрифуги используется метод естественного осаждения под действием силы тяжести для отделения среды от клеток, чтобы заменить всю или часть свежей среды. Однако у него есть ограничения по применению — он подходит только для клеток, которые могут образовывать клеточные кластеры определенного размера (в противном случае они не могут оседать естественным путем и могут центрифугироваться только на низкой скорости), особенно при работе с клетками, для пролиферации которых требуется агрегация клеток. , такие как НК-92, НК- 92 МИ, Юркат. Этот метод может свести к минимуму механическое повреждение, вызванное процессом центрифугирования во время процесса обмена жидкости, сохраняя при этом агрегированную клеточную массу, а удаление клеточного детрита является относительно тщательным.
После освоения вышеперечисленных пунктов, а также хорошего клеточного посева, уже не за горами рост «красивых» суспензионных клеток!
планшет для культивирования клеток
U-образные планшеты для культивирования клеток Yongyue Medical в основном используются для культивирования суспензионных клеток с использованием полистирола медицинского качества (ПС), производимого в цехе очистки 100, 000-, стерилизованного облучением, без ДНКазы, РНКазы и пирогена. -бесплатно, безопасность и защита окружающей среды.
Планшеты для клеточных культур доступны в различных спецификациях для удовлетворения потребностей различных бактериальных культур. Типы продуктов делятся на 6-ну, 12-ну, 24-ну, 48-ну, 96-ну и 384-ну, из которая 96-скважина делится на плоскодонную, U-образную, V-образную; U-образные культуральные чашки в основном используются для культивирования суспензионных клеток; V-образные культуральные чашки в основном используются для иммунологических экспериментов по гемагглютинации.