Технология ПЦР аналогична естественному процессу репликации ДНК, и ее специфичность зависит от олигонуклеотидных праймеров, комплементарных обоим концам целевой последовательности. ПЦР состоит из трех основных стадий реакции: денатурации, отжига и удлинения. Этот реакционный процесс осуществляется в реакционном контейнере для ПЦР. С непрерывным развитием инструмента для амплификации генов реакционный контейнер также претерпел постепенное развитие центрифужной пробирки от 1,5 мл до 0,2 мл (0,25 мл) до тонкостенных {{ 7}}.2 мл предназначен для ПЦР. , 0.1 мл пробирка для ПЦР. С увеличением числа реакций амплификации ПЦР постепенно формируются высокопроизводительные контейнеры для амплификации генов для ПЦР-стрипов и ПЦР-планшетов.
ПЦР состоит из трех основных стадий реакции: денатурация-отжиг-удлинение.
Денатурация матричной ДНК:
После того, как матричная ДНК нагревается примерно до 94 градусов в течение определенного периода времени, двухцепочечная ДНК матричной ДНК или двухцепочечная ДНК, образованная с помощью ПЦР-амплификации, диссоциирует, так что ее можно объединить с праймером для получения для следующего цикла реакции.
Отжиг (ренатурация) матричной ДНК с праймерами:
После того, как ДНК-матрица денатурирована в одну цепь путем нагревания и температура снижена примерно до 55°С, праймеры спариваются с комплементарной последовательностью одной цепи ДНК-матрицы.
Расширение праймеров:
Под действием Taq конъюгат ДНК-матрица-праймер использует dNTP в качестве реакционного сырья для синтеза новой полузарезервированной цепи репликации, комплементарной цепи ДНК-матрицы, по принципу спаривания оснований и полузарезервированной репликации.
Основные принципы технологии ПЦР
Технология основана на реакции ферментативного синтеза ДНК-полимеразы в присутствии матричной ДНК, праймеров и четырех дезоксирибонуклеотидов.
ДНК-полимераза использует одноцепочечную ДНК в качестве матрицы для инициации синтеза с небольшим фрагментом двухцепочечной ДНК. Один или два синтетических олигонуклеотидных праймера комбинируют с комплементарной последовательностью в матрице одноцепочечной ДНК с образованием частичной двухцепочечной ДНК.
При подходящей температуре и окружающей среде ДНК-полимераза добавляет дезоксимононуклеотид к 3'-ОН-концу праймера и использует его в качестве отправной точки для расширения вдоль направления 5'→3' матрицы для синтеза новой комплементарной цепи ДНК.
Разница между пробирками для ПЦР и центрифужными пробирками
Пробирки для ПЦР:
Реакционный планшет для ПЦР является 96-луночным или 384-луночным, который специально разработан для периодических реакций. Принцип заключается в том, что пропускная способность машины для ПЦР и секвенатора обычно составляет 96 или 384.
Центрифужная пробирка:
Центрифужная пробирка не обязательно является пробиркой для ПЦР. Существует много видов центрифужных пробирок в зависимости от их емкости. Обычно используются 1,5 мл, 2 мл, 5 мл, 15 или 50 мл, а самый маленький (250 мкл) можно использовать в качестве пробирки для ПЦР.
Как выбрать пробирки для ПЦР
Мы решили разместить пробирки для ПЦР в надежде выбрать наиболее точное место для температуры.
Наиболее точным положением температуры должно быть положение над датчиком температуры под модулем (независимо от неточного значения температуры датчика).
Положение датчика температуры разных инструментов ПЦР различно.
Например, модель AB 2720 имеет только один посередине, модель MJ 200 имеет три датчика: нижний левый, средний и верхний правый, датчики Eppendorf должны располагаться в ряду A или H, а модель Dongshenglong 811 имеет три датчика температуры, B{{3} } следует выбрать , C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, поскольку эти точки являются пунктуальными точками температуры.
